师姐
谁又把离心机转冒烟了？修理工程师已经把我们实验室拉黑了！
昨晚熬夜提外泌体来着，用超速离心法通过不同转速逐步去除杂质，不多运行几次，纯度怎么保证啊？这不又到了一批血液样本，我准备和之前的细胞上清一起离，这样总能减少离心机压力了吧。
师妹
师姐
你这是危险操作啊！啥样本都一股脑超离提纯，得率能好吗？
啊？得率低不是样本的问题么，超离法还能有错？
师妹
师姐
超离法没错，但不同的样本特性千差万别，选对合适的提纯方法比努力更重要～ 文末附了 提纯方法选择思维导图 ，你可以先看看。
那么如何快速精准选择适合自己的外泌体提纯方法？宇玫博根据不同样本个性化定制试剂盒，操作简便，结果稳定可靠，血液、尿液、细胞上清甚至是植物等，统统不在话下。即使是没有离心机的小伙伴也能轻松 get 高纯度外泌体。点击下方图片，免费申请试用～
聚乙二醇 PEG 沉淀法搭配 EPF 纯化柱试剂盒
阴离子交换层析法试剂盒（无需离心机）
以下视频详细解答了外泌体提取纯化过程中，不同样本的特性及各自合适的提纯方法，包你提升外泌体纯度及得率~
常见的外泌体提纯技术
1. 传统超速离心技术
作为早期文献提到的标准，超速离心法是科研人最先接触到的，也是大多数的选择，但是往往超离得率非常低（15%左右），很难拿到结果；对于高成本样本诸如细胞培养上清，提纯得率低会间接导致成本上升；而且超离的除菌能力非常鸡肋，很多情况下超离后的样本依然会导致细胞污染；最后，使用过程中诸如管子爆裂，设备排队，长时间操作，转子损坏维修时间长等问题也是很多实验室面临的常规隐患。
2. 经典 PEG 沉淀法
作为比较经典的提取方法，PEG 沉淀法几乎兼容所有样本，例如细胞上清、血液、组织、尿液、乳液、体液等等，得率较高（35～40%），操作简便-全程不到两个小时，性价比高，但混杂蛋白干扰多，对于做常规检测和 RNA 测序来说，需要结合 EPF 柱除菌和游离的核酸以及大的囊泡等，而宇玫博试剂盒将沉淀法和 EPF 柱进行结合，提供更省时省力的解决手段。
● 2024 年 6 月发表在 Molecular cancer 上的一篇文章【1】就使用了宇玫博外泌体提取纯化试剂盒（UR52121））进行胆囊癌细胞外泌体提取，结果符合各检测指标，发现一种新颖且有广泛应用价值的胆囊癌血管生成生物标志物，为未来的胆囊炎治疗提供更多参考思路。
● 无独有偶，同一个试剂盒被使用进行大肠杆菌的膜外囊泡的提取，助力客户帕金森病研究【2】。该研究揭示了风险基因，如富亮氨酸重复蛋白激酶 2（LRRK2）和环境因素互作触动神经元内 α-突触核蛋白（α-syn）启动帕金森的机制，为后续帕金森的治疗开辟新途径。
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3. 尺寸排阻-SEC 组合法
对于蛋白组学来讲，实验往往需要结合尺寸排阻-SEC 法提纯外泌体，帮助排除杂蛋白干扰，检测相对低丰度的蛋白。
而且，尺寸排阻-SEC 法组合操作后外泌体纯度高、生物活性好，整个纯化过程控制在 30 分钟内。ExoPura® Basic 外泌体纯化柱试剂盒（UR52180）适用于澄清度高的非复杂生物样本（如细胞上清、牛奶澄清液等）中外泌体囊泡的分离和纯化，且可重复使用。但 SEC 法对于杂蛋白去除率高达 94%，所以该实验对样本量和初始的蛋白浓度有要求，也就是说，需要准备较多的样本量。感兴趣的话，赶快点击下图申请试用吧～
4. 阴离子交换层析法
没有高速离心机的实验室，可以选择阴离子交换层析法（UR52172）解决外泌体提纯，上样到获得外泌体仅需 1 小时；高度适配于细胞培养上清液、尿液等非粘稠性样本，无剪切力，保留外泌体的完整性和生物活性；层析法纯度更高，回收率 30%，粒径均一且重复性好。不过，如果后续外泌体浓度偏低，可考虑结合超滤管做浓缩。还在犹豫什么，手快的科研人已经享受上「无离心烦恼」的提取方式啦，点击下方图片申请试用 ~
对于细胞上清样本而言，前期使用不同类型的外泌体培养基，对后期的提纯效果也有不同影响，具体见表 1。
表 1 各类培养基优缺点总结表
在细胞培养源头把杂蛋白种类控制好，采用化学成分限定培养基，能从根本上使外泌体纯化变简单，直接采用沉淀法 + EPF 柱，即可获取比较高纯度的外泌体，减少提取纯化链路，减少操作过程的外泌体损失。外泌体专用无血清培养基（U51102）适用于肿瘤细胞和 T 细胞等，且不含生长因子，细胞培养过程中无需添加血清即可达到完全培养基的培养状态，有利于外泌体的收获。
● 空军军医医科大学西京医院的教授团队在 Journal of neuroinflammation 发表研究【3】联合使用 Umibio 去外泌体胎牛血清（UR50202）进行胰腺腺泡细胞的培养实验，在排除外源颗粒干扰下保证了细胞的正常生长及外泌体的正常分泌，为接下来的外泌体提取纯化实验提供了高质量的细胞上清。
●更有文章【4】直接集齐三类宇玫博王牌产品（外泌体专用培养基-UR51102；外泌体提取纯化试剂盒-UR52121；外泌体标记用的外泌体红色荧光标记染料（PKH26-UR52302 & 外泌体绿色荧光标记染料（PKH67）-UR52303），助力福建医科大学附属协和医院检验科曹颖平教授团队在 Cellular & Molecular Biology Letters 发表相关研究，为临床解决高毒力肺炎克雷伯菌相关的脓毒症所致急性肺损伤提供新的靶点和理论依据。
宇玫博还研制了外泌体专用间充质干细胞培养基，适用于 MSC 细胞的无血清、化学成分限定的培养基，专门用于该类细胞外泌体的制备与生产。而且细胞培养过程中无需添加血清或血小板裂解物，很大程度减少外源颗粒的干扰，促进 MSC 细胞分泌外泌体。点击下图一键试用~
宇玫博试剂盒针对性处理多种样本，一键解锁外泌体提纯外挂。更有百篇文献助力，结果安全可靠，如果你还在犹豫选择什么提纯方法，建议保存下方的思维导图，包你速成外泌体提纯专家！
内容策划：王丹琦
内容审核：吴军
题图来源：自己做的
参考文献
[1] Exosomal long non-coding RNA TRPM2-AS promotes angiogenesis in gallbladder cancer through interacting with PABPC1 to activate NOTCH1 signaling pathway. Mol Cancer. 2024 Mar 27;23(1):65.
[2] Escherichia coli triggers α-synuclein pathology in the LRRK2 transgenic mouse model of PD. Gut Microbes. 2023 Dec;15(2):2276296.
[3] Optimized rAAV8 targeting acinar KLF4 ameliorates fibrosis in chronic pancreatitis via exosomes-enriched let-7s suppressing pancreatic stellate cells activation. Mol Ther. 2024 Aug 7;32(8):2624-2640.
[4] Exosomal miR-155-5p drives widespread macrophage M1 polarization in hypervirulent Klebsiella pneumoniae-induced acute lung injury via the MSK1/p38-MAPK axis, Cell Mol Biol Lett. 2023 Nov 13;28(1):92. doi: 10.1186/s11658-023-00505-1.
