师弟
这质粒构建太看运气了，从酶切到连接、转染，我处处小心，结果鉴定出来是个假阳性克隆。
确实，酶切不完全，载体或目的基因残留的未切开片段会导致连接失败；酶切温度，缓冲液成分稍有偏差会改变酶识别位点的专一性从而产生错误的片段；即使成功连接转染，抽提鉴定出来发现不是想要的重组子，前期的努力也都付诸东流。
师兄
师弟
有没有一种不需要酶切也能构建质粒载体的基因组装技术呢？
你可以考虑无缝克隆技术。这是一种基于同源重组的基因组装技术，核心原理是通过三种酶的协同作用，在单管反应中实现 DNA 片段的快速连接，无需限制性内切酶，避免了传统克隆方法中繁琐的酶切和纯化步骤。最近 Gibson 无缝克隆在做免费试用活动，你可以试试～
师兄
Gibson 无缝克隆，不受片段序列限制，实现任意组装，让您的载体构建快人一步，点击下方图片申请试用～
试用详情：
1. 规格：10T；2. 运费：包邮 3. 提交试用申请后，将会在 7～14 个工作日与您联系
Gibson 无缝克隆原理
Gibson 无缝克隆由 Daniel G. Gibson 博士开发。通过 T5 核酸外切酶、高保真 DNA 聚合酶、耐热 DNA 连接酶三种酶的协同作用来实现 DNA 片段的重组连接。
T5 核酸外切酶：从 5’ 到 3’ 方向消化 DNA 片段，形成单链突出区域。
高保真 DNA 聚合酶：以单链 DNA 为模板，填补缺口，形成完整的双链 DNA。
耐热 DNA 连接酶：将 DNA 片段连接起来，形成无缝的 DNA 分子 112。
Gibson 无缝克隆的优势
使用简单：兼容 PCR 与酶切体系，省去繁琐的纯化步骤，显著缩短实验时间
超高效率：可稳定支持 5～6 个片段在同一克隆体系中组装，适用于复杂构建体的构建
稳定可靠：37℃ 放置一周或冻融 30 次后，性能无明显下降，确保实验结果的稳定性
用户反馈结果：
可以看到质粒转染的平板涂布结果，无论是 1 kb 的小片段还是 4.5 kb 的大片段，都能够得到插入目的片段的重组子，且阳性率高达 95%。
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内容策划：王丹琦
内容审核：陈涵雅
题图来源：图虫创意
参考文献
• AmTCP8 is a negative regulatory factor for salt tolerance in mangrove Avicennia marina by driving AmLOX3 expression to promote ROS accumulation;Industrial Crops and Products;IF:5.6;DOI:10.1016/j.indcrop.2024.119170;
• Uncovering PheCLE1 and PheCLE10 Promoting Root Development Based on Genome-Wide Analysis;International Journal of MolecularSciences;IF:4.9;DOI:10.3390/ijms25137190;
• Unraveling developmental patterns and differentiation trajectories in a single developing internode of Moso Bamboo (Phyllostachys edulis); Industrial Crops & Products;IF:5.6;DOI:10.1016/j.indcrop.2024.119646.
