JCI：彭宏凌/傅征/单强/黄伟珊团队发现，敲除这个基因，让CAR-T细胞更持久，从而降低肿瘤复发率

编辑丨王多鱼

排版丨水成文

嵌合抗原受体T细胞疗法（CAR-T）作为一种突破性的细胞免疫疗法，已广泛应用于治疗白血病等多种癌症。目前，已有10种CAR-T产品获得临床治疗批准。尽管CAR-T疗法在白血病治疗中取得了显著疗效，但其在临床实践中仍面临诸多挑战，尤其是肿瘤复发问题。肿瘤微环境中T细胞的耗竭及CAR-T细胞在体内的短暂存活，是影响其疗效的主要障碍之一。

近日，中南大学湘雅二医院彭宏凌教授、傅征博士、北京协和医学院苏州系统医学研究所单强研究员、路易斯安那州立大学黄伟珊教授及镁伽科技等团队在Journal of Clinical Investigation期刊发表了题为：IL-2-inducible T cell kinase deficiency sustains chimeric antigen receptor T cell therapy against tumor cells 的研究论文。

该研究发现，IL-2诱导T细胞激酶（ITK）可以作为基因敲除或抑制的靶点，敲除或抑制ITK可促进CAR-T细胞在体内存活，从而更有效地抑制肿瘤复发。该研究为开发更具持久性的CAR-T细胞疗法提供了新的潜在策略。

ITK（IL-2诱导T细胞激酶）主要在T细胞中表达，是T细胞受体（TCR）信号通路下游的关键调节因子，负责调控TCR信号的强度，进而影响T细胞的活化和分化。慢性TCR活化会导致T细胞耗竭，而通过抑制或敲除ITK，可以有效减缓T细胞耗竭，已在小鼠模型中获得成功。然而，ITK在CAR-T细胞抗肿瘤活性中的作用尚未完全阐明。

在这项最新研究中，研究团队结合CRISPR-Cas9基因编辑技术及多种体外和体内CAR-T细胞治疗模型，深入探讨了ITK缺失在CD19-CAR-T细胞中的功能和作用机制。

T细胞在被激活和快速扩增之后，会进入一个急剧收缩的阶段（contraction phage）。研究团队发现，ITK缺失并不影响CAR-T细胞的体外杀伤功能，还显著提高了CAR-T细胞的长期存活，减少了细胞凋亡，并增强了增殖能力。

构建ITK缺失的CD19-CAR-T细胞

ITK缺失促进了CD19-CAR-T细胞在体外的长期扩增

进一步研究表明，ITK敲除后的CAR-T细胞在转录水平上发生了显著变化。Bulk RNA测序和单细胞测序显示，ITK敲除可显著降低T细胞耗竭相关分子（例如LAG-3）的表达，并增强T细胞记忆相关分子的表达（例如TCF7、KLF2、CD127等）。这些结果表明，ITK敲除可以减少CAR-T细胞耗竭，促进记忆型CAR-T细胞的产生。

在体内动物肿瘤模型的实验中，研究团队进一步验证了ITK缺失对正常人来源的T细胞制备的CAR-T细胞存活和抗肿瘤效果的影响。在慢性淋巴性白血病（MEC1）模型中，ITK敲除的CAR-T细胞表现出更少的耗竭细胞和更多的记忆细胞，并能有效清除肿瘤。这些结果表明，ITK缺失有助于降低CAR-T细胞耗竭，并增强其在体内的存活和长期抗肿瘤活性。

在急性淋巴性白血病（Raji）模型中，ITK敲除的CAR-T细胞不仅能够更好地抑制肿瘤复发，还显著提高了小鼠的生存率。这些实验结果表明，ITK缺失显著延长了CAR-T细胞的体内存活时间，进一步降低了肿瘤复发的风险。

此外，研究团队还在慢性淋巴性白血病患者来源的T细胞中验证了ITK抑制的效果。结果发现，ITK抑制不仅可以减少患者来源T细胞的耗竭，还能促进CAR-T细胞记忆功能的增强。在进一步的实验中，研究团队将慢性淋巴性白血病患者来源的T细胞进行ITK敲除，并注射到MEC1慢淋肿瘤动物模型中。结果显示，野生型慢淋患者T细胞制备的CAR-T细胞未能长期有效地控制MEC1肿瘤，而ITK敲除的患者T细胞制备的CAR-T细胞则能更好地、持续地控制肿瘤，并显著改善小鼠的长期生存率。ITK缺失的CD19-CAR-T细胞在控制肿瘤复发方面表现出色，进一步实现了更持久的治疗效果。